Wie berechnet man die spezifische Aktivität?
Hallo Leute,
wie berechne ich die spezifische Aktivität von Uricase bei Subtratsättigung unter der Annahme, dass für ein Experiment eine Enzymkonzentration von 20 mg/l eingesetzt wurde?
Am besten wäre es bestimmt mit Hilfe der Michaelis-Menten-Gleichung:
v0= vmax*[S] / Km+[S]
Vmax und Km hab ich in einer voherigen Teilaufgabe bestimmt: Vmax=0,79 nM/min und Km=0,395 µM
Kann mir bitte jemand helfen?
1 Antwort
Vmax = 0,79 nM/min = 0,79 nmol*L⁻¹*min⁻¹
Als Enzymaktivität a mit der Einheit U(nit) wird üblicherweise diejenige Enzymmenge verstanden, die unter genau definierten Bedingungen 1 μmol Substrat pro Minute umsetzt. Dabei wählt man sinnvollerweise eine Substratkonzentration, bei der Substratsättigung vorliegt. Das heißt, dass dabei alle Enzymmoleküle mit Substrat [S] =[ES] belegt sind und eine Erhöhung von [S] keine Erhöhung der Reaktionsgeschwindigkeit bewirkt.
Gemäß dieser Definition könnte man die Enzymaktivität wie folgt angeben:
a = 0,79 * 10⁻³ μmol*L⁻¹*min⁻¹ = 0,79 * 10⁻³ U
Der Vollständigkeit halber müsste man noch die experimentellen Randbedingungen angeben: Pufferzusammensetzung und - konzentration, pH-Wert und Temperatur. Alternativ kann die Aktivität auch mit der etwas moderneren Einheit Katal angegeben werden. Dabei gilt die Umrechnung:
1 kat = 6 * 10⁷ U
Und die spezifische Aktivität Aspez. bezieht schlicht die Aktivität a auf die Masse an eingesetztem Protein.
Aspez. = a/mProt
Das liefert im vorliegenden Fall:
Aspez. = 0,79 * 10⁻³ μmol*L⁻¹*min⁻¹/(20 mg*L⁻¹) = 0,395 μmol*min⁻¹*mg⁻¹
Heißt: Ein Milligramm Enzym setzt pro Minute 0,395 μmol Substrat bei Substratsättigung um.
Siehe hierzu auch: https://www.lebensmittellexikon.de/e0002370.php
Ich hab eine Frage zu deinen Berechnungen: also du unten die 0,79*10^-3/20 berechnest. Müsste da nicht eine viel kleinere Zahl rauskommen. Meiner Ansicht nach 3,95*10^-5. Oder bin ich irgendwo mit den Einheiten durcheinander gekommen?